分光光度計，又稱光譜儀，是將成分復雜的光，分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜：鎢燈光源所發(fā)出的380～780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后，可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續(xù)色譜；該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

儀器組成

分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。

儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。

原理：

分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關系如下式：

式中 :A 為吸光度；

I0為入射的單色光強度；

I 為透射的單色光強度；

T 為物質的透射率；

k 為摩爾吸收系數(shù)；

L 為被分析物質的光程，即比色皿的邊長；

c 為物質的濃度；

物質對光的選擇性吸收波長，以及相應的吸收系數(shù)是該物質的物理常數(shù)。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區(qū)，除某些物質對光有吸收外，很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱

由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應用標準品或對照品同時操作。

操作方法：

1.接通電源，打開儀器開關，掀開樣品室暗箱蓋，預熱10分鐘。

2.將靈敏度開關調至“1”檔（若零點調節(jié)器調不到“0”時，需選用較***。）

3.根據(jù)所需波長轉動波長選擇鈕。

4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內，使空白管對準光路。

5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調節(jié)零點調節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。

6.蓋上暗箱蓋，調節(jié)“100”調節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

7.比色完畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。